研究方向
Wnt3a(基因位于 小鼠11号染色体)是Wnt/β-catenin信号通路的核心配体。作为分泌型糖蛋白,通过调控胚胎发育、干细胞自我更新及组织再生,在神经发生、骨骼稳态和癌症进展中发挥关键作用。其表达异常可导致发育缺陷或肿瘤发生,是发育生物学与再生医学研究的重要靶点。
1. 分子特性与功能机制
(1)结构与分泌调控
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翻译后修饰:
- 棕榈酰化(由Porcn介导)对分泌和活性至关重要,缺失导致胞内滞留;
- 糖基化修饰(如N-连接糖基化)影响受体结合亲和力(KD≈10-9 M)。
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信号级联:
- 结合Frizzled/LRP5/6受体复合物,抑制β-catenin磷酸化降解,促进核转位激活TCF/LEF转录因子;
- 非经典通路(如Wnt/Ca2+)调控细胞极性(如原肠胚运动)。
(2)疾病模型关联
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发育缺陷:
- Wnt3a-/- 小鼠胚胎致死(原条形成失败);
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神经退行性疾病:
- 阿尔茨海默病模型中,Wnt3a过表达减少Aβ斑块(通过激活小胶质细胞吞噬);
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癌症进展:
- 结直肠癌类器官中Wnt3a驱动β-catenin核转位(靶基因Cyclin D1表达↑5倍)。
2. 研究工具与干预策略
(1)实验模型
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条件性敲除:
- Nestin-Cre;Wnt3afl/fl 研究神经干细胞维持;
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重组蛋白应用:
- 活性Wnt3a蛋白(LDN实验室)维持胚胎干细胞未分化状态(浓度≥100 ng/mL)。
(2)治疗潜力
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组织再生:
- 水凝胶缓释Wnt3a促进皮肤创伤修复(临床前模型愈合速度↑40%);
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靶向抑制:
- LGK974(Porcn抑制剂)阻断Wnt3a分泌治疗Wnt依赖性肿瘤。
3. 检测方法与挑战
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活性检测:
- TOPFlash荧光素酶报告基因定量β-catenin信号强度;
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成像技术:
- 全内反射荧光显微镜(TIRFM)观察Wnt3a囊泡分泌动态。
挑战与展望
- 递送精准性:开发组织特异性Wnt3a激活系统(如光控释放纳米颗粒);
- 剂量调控:解析低浓度(促再生)与高浓度(促癌)效应的分子阈值;
- 跨物种应用:人源化Wnt3a小鼠模型验证治疗安全性。
生物活性
Measured by its ability to induce Topflash reporter activity in HEK293T human embryonic kidney cells. The ED50 forthis effect is <500 ng/mL.
Swiss Prot:
P27467
种属:
Mouse
表达宿主:
293F
表达区间:
Ser19-Lys352
实际分子量:
65-70
kDa
标签:
C-hFc&His tag
纯度:
>95% by SDS-PAGE.
内毒素:
<0.1EU/ug of the protein by LAL method.
制剂:
Lyophilized from a 0.22 μm filtered solution of PBS, pH 7.4.Contact us for customized product form or formulation.
描述:
Recombinant Mouse Mouse Wnt3a Protein is produced by 293F expression system. The target protein is expressed with sequence (Ser19-Lys352) of Mouse Mouse Wnt3a (Accession P27467) fused with a C-hFc&His tag.
储存:
Store at -20℃.Store the lyophilized protein at -20℃ to -80 ℃ up to 1 year from the date of receipt.
After reconstitution, the protein solution is stable at -20℃ for 3 months, at 2-8℃ for up to 1 week.
未开盖的干粉蛋白在 -20°C至-80°C可保存12个月;
复溶之后,蛋白溶液在-20°C及以下可保存3个月,在2-8℃可保存1周。
复溶:
Centrifuge the vial before opening. Reconstitute to a concentration of 0.1-0.5 mg/mL in sterile distilled water. Avoid vortex or vigorously pipetting the protein. For long term storage, it is recommended to add a carrier protein or stablizer (e.g. 0.1% BSA, 5% HSA, 10% FBS or 5% Trehalose), and aliquot the reconstituted protein solution to minimize free-thaw cycles.
收到重组蛋白产品之后请检查蛋白冻干粉末是否贴于瓶底,如果粉末浮起,开盖之前请先低温离心。将蛋白用说明书中指定的缓冲液复溶至0.1-0.5 mg/mL(请注意蛋白复溶浓度不能低于0.1 mg/mL),室温平衡5-10 min保证充分溶解,复溶过程中请不要剧烈涡旋及吹打蛋白溶液。如需长期储存,建议复溶时添加载体蛋白或者稳定剂(如0.1% BSA, 5% HSA, 10% FBS 或者 5% 海藻糖),同时将复溶后的蛋白溶液按照需求进行分装,储存于-20°C至-80°C,随取随用,避免反复冻融。